Sensibilità delle unità
La maggior parte delle specifiche del lettore di micropiastre esprimerà la sua sensibilità come quantità di una sostanza, ATP o Luciferasi per luminescenza e fluorescina per fluorescenza. Per altre tecnologie di rilevamento potrebbe essere una qualsiasi altra sostanza rilevata da un kit che utilizza tale tecnologia. Useranno anche termini come Femtomole, Attomole e Zeptomole. Allora, cosa significano questi termini?
Come sai, il numero di Avogadro è il numero di molecole in una mole di una sostanza. Ha un valore di 6.022 x 1023. Ciò significa che una mole di una sostanza è composta da 602.250.000.000.000.000.000.000 di molecole:
- Una Femtomole è 1 x 10-15 o un quadrilionesimo di mole (0,000000000000001). Si tratta di ~ 602.200.000 molecole (numero X di Avogadro (1 x 10-15).
- Un Attomole è 1 x 10-18 che è un quintilionesimo di mole (0,000000000000000001) ed è ~ 602,200 molecole.
- Uno Zeptomolo è 1 x 10-21 che è un sestilionesimo di mole (0,000000000000000000001) ed è ~ 602 molecole.
Come puoi vedere da quanto sopra, abbiamo a che fare con numeri estremamente piccoli, specialmente a livello di Zeptomole. Quindi, come possiamo utilizzare tutto questo per valutare le prestazioni di un qualsiasi strumento? Ci sono due criteri chiave che dobbiamo prendere in considerazione: il limite inferiore di rilevamento (sensibilità) e il coefficiente di variazione.
- Il limite inferiore di rilevamento è la quantità minima di campione che genera una risposta dello strumento al di sopra del noise del bianco ed è indicato come sensibilità.
- Il coefficiente di variazione è la percentuale di variazione nel tempo su un insieme di letture: ciò implica la coerenza delle prestazioni dello strumento.
Il coefficiente di variazione e il limite inferiore di rilevamento devono essere ottenuti utilizzando solo standard noti.
Calcolo del limite inferiore di rilevamento
Noi di Berthold utilizziamo solo standard noti e la seguente formula per calcolare il limite di rilevamento:
| ConcentrazioneS | concentrazione del segnale standard * in pg / mL |
| StdevB | deviazione standard dei pozzetti riempiti di bianco |
| meanS | media dei pozzetti con standard * |
| meanB | media dei pozzetti riempiti di bianco |
* Qualsiasi punto standard con letture medie almeno 100 volte superiori alle letture medie del bianco.
A causa della formula sopra, uno fondo stabile diventa estremamente importante. Prendiamo 3 deviazioni standard del valore medio del fondo che è> 99% della distribuzione normale. Uno strumento sensibile avrà una chiara distinzione tra il disturbo del bianco e il segnale del campione. Guarda l'esempio di seguito per vedere l'impatto di una maggiore variazione di fondo:
Strumento 1 | Strumento 2 | |
|---|---|---|
| meanB | 50 | 15 |
| StdevB | 10 | 15 |
| ConcentrazioniS (pg/mL) | 100 | 100 |
Segnale Standard | 100,000 | 100,000 |
Segnale/disturbo | 2,000 | 6,667 |
Limite di rilevamento calcolato | 0.030 | 0.045 |
Sebbene lo strumento 2 abbia un segnale di fondo inferiore, è meno sensibile a causa della sua deviazione standard di fondo più elevata. Un limite inferiore di rilevamento (sensibilità) può aiutare a risparmiare tempo e denaro, soprattutto quando si rilevano segnali vicini al limite di rilevamento. Questo può aiutare a ridurre il consumo di reagenti costosi o cellule preziose. Ciò può anche ridurre significativamente il tempo di lettura per campione e risparmiare tempo di funzionamento totale. La stabilità del rilevatore utilizzato nello strumento è estremamente importante quando si guarda alla sensibilità. Questo è il motivo per cui noi di Berthold selezioniamo tutti i nostri Photo Multiplier Tubes (PMT) e li testiamo utilizzando vari parametri e a varie temperature per garantire che il miglior PMT vada nei lettori di piastre Berthold.
- A basso rumore, fondo stabile
- Efficienze blu / verde / rosso
- Stabilità a lungo termine
- Elevate efficienze di rilevamento
Per i nostri lettori di micropiastre vengono utilizzati solo PMT con Low-noise, fondo stabile, alta efficienza e stabilità a lungo termine alle normali temperature di laboratorio. Ciò garantisce le prestazioni necessarie per una ricerca di successo. Ciò rende il luminometro per micropiastre Centro XS e il lettore multimodale Tristar 5 gli strumenti più sensibili della loro categoria.