PRINCIPIO DELLE MISURE DI ATP
L'ATP partecipa all'ossidazione della luciferina da parte dell'enzima luciferasi lucciola (FIREFLY LUCIFERASE) che è una reazione che produce luce. La quantità di luce prodotta è proporzionale alla quantità di luciferina ossidata. Questa reazione è molto popolare nei assay del gene reporter in cui ATP e luciferina sono in eccesso e la quantità o la luce prodotta è limitata dall'espressione della luciferasi (il reporter). Tuttavia, la stessa reazione può essere utilizzata per quantificare l'ATP se entrambe luciferina e luciferasi sono in eccesso.
APPLICAZIONI DELLE MISURE DI ATP
Le misure dell'ATP vengono utilizzate per monitorare le materie prime nella produzione di alimenti e farmaci. Le apparecchiature sanitarie utilizzano sia misure ATP per la contaminazione batterica che impianti di trattamento delle acque reflue.
Nelle industrie biotecnologiche e farmaceutiche le misure dell'ATP vengono utilizzate per valutare la proliferazione cellulare, l'apoptosi e la citotossicità. Assays di vitalità cellulare, ad es. nei test di chemiosensibilità tumorale, è possibile eseguire test di sensibilità agli antibiotici, determinazione di enzimi e metaboliti nelle reazioni legate all'ATP. Il test bioluminescente dell'ATP è diventato molto popolare grazie alla sua elevata sensibilità e facilità d'uso.
NOTE APPLICATIVE RELATIVE ALLE MISURE ATP
ATP measurements with the Orion II Comparison of standard curves for ATP with the Orion II Microplate Luminometer
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ToxiLight™ Cytotoxicity Assay with the Orion II ToxiLight™ Non-Destructive Cytotoxicity Bio Assay Kit (Lonza) with the Orion II Microplate Luminometer
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ViaLight™ Assay with the Orion II ViaLight™ Cell proliferation and Cytotoxicity BioAssay Kit (Lonza) with the Orion II Microplate Luminometer
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Rapid Bacterial Detection with the Sirius L Rapid Bacterial Detection Assay (Useful Biology) with the Sirius L Tube Luminometer
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ATP detection limit with Sirius L Below amol ATP detection limit with Sirius L Tube Luminometer and ATP Reagent SS from BioThema
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STRUMENTI CONSIGLIATI PER MISURE ATP
Il secondo elemento più importante necessario per la quantificazione dell'ATP è un lettore di luminescenza. I luminometri portatili sono popolari per il monitoraggio dell'igiene delle superfici. Tuttavia, la sua sensibilità e il suo I’Intervallo dinamico sono molto limitate e normalmente adatte solo per analisi qualitative. Per gli assay che richiedono un'elevata sensibilità e affidabilità, si consiglia uno strumento di laboratorio ad alte prestazioni; le opzioni includono luminometri a tubo e lettori di micropiastre a luminescenza.