PRINCIPIO DELL' IMMUNOASSAYS
Il principio di base di questi test è la specificità della reazione anticorpo-antigene. Esistono diversi formati di immunoassays (vedere di seguito in "Tipi di test immunologici"), ma tutti implicano un legame anticorpale specifico al suo antigene e una marcatura utilizzata per rilevare il complesso antigene-anticorpo.
La marcatura può essere collegata all'anticorpo primario che si lega all'antigene, a un anticorpo secondario che si lega all'anticorpo primario o ad una porzione di antigene che viene aggiunta al campione e compete con l'antigene da misurare. Per separare il legato dalla frazione libera è necessaria almeno una fase di lavaggio. In realtà, poiché gli immunoassays di solito comportano più fasi di lavaggio, dispensazione e incubazione, le di analisi vengono spesso utilizzate per automatizzare il processo.
TIPI DI IMMUNOASSAY
Immunoassays tramite segnale
Un modo utile per classificare gli immunoassays è il tipo di segnale misurato, poiché questo ha un impatto sulla sua sensibilità e sulla strumentazione necessaria per misurarli. I tipi più comuni di test immunologici sono:
- ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) se il segnale è fornito da un enzima che produce un substrato colorato misurato usando l'assorbanza. Di solito vengono misurati utilizzando un lettore ELISA o in una ELISA workstation che automatizza il test completo. Sono il tipo più comune di immunoassay, ma ELISA ha una sensibilità limitata, che può essere migliorata passando a metodi di rilevamento più sensibili.
- FIA (Fluorescent ImmunoAssay) il segnale è fornito da coloranti fluorescenti (es. FITC); in questo caso la misura viene eseguita utilizzando un fluorimetro per micropiastre.
- CLIA (ChemiLuminescent ImmunoAssay) il segnale è fornito da un enzima che catalizza una reazione che produce luce. Sono misurati utilizzando un luminometro per micropiastre. La luminescenza è uno dei metodi di rilevamento che fornisce la massima sensibilità.
- RIA (RadioImmunoAssay) il segnale è fornito da radiazioni provenienti da un radioisotopo, come 125I. Poiché sono spesso isotopi che emettono raggi gamma, vengono solitamente misurati utilizzando un gamma counter. La radiazione è un altro dei metodi di rilevamento che fornisce la massima sensibilità. Nuove tecnologie di rilevamento sono state applicate anche agli Immunoassay come la tecnologia TRF e Alpha.
Immunoassays per formato
Esistono diversi formati di immunoassays, a seconda di quali complessi antigene-anticorpo si formano e dove si trova il segnale da quantificare. Poiché la terminologia deriva dal più comune test immunologico, ELISA, sono spesso chiamati con il nome dei rispettivi formati ELISA:
- ELISA Direct: l'anticorpo marcato si lega direttamente all'antigene di interesse.
- ELISA Indirect: l'anticorpo marcato si lega all'anticorpo di interesse, che è legato a un antigene immobilizzato.
- Sandwich ELISA: l'antigene di interesse viene catturato tra un anticorpo immobilizzato e l'anticorpo marcato.
- ELISA Competitive: l'antigene campione compete con un antigene inibitore, legandosi a una quantità limitata di anticorpo marcato.
Puoi trovare maggiori informazioni sui formati di immunoassay nella nostra pagina Formati ELISA.
APPLICAZIONI DI IMMUNOASSAY
I immunoassays sono ampiamente utilizzati nella ricerca, nella scoperta di farmaci e nella diagnostica per il rilevamento altamente specifico ed efficiente in termini di costi di analiti inclusi, ma non limitati a:
- Marcatori tumorali, ad es. AFP, CEA, hCG, PSA ... Marker cardiaci, ad es. CK-MB, CRP, digossina, mioglobina…
- Assays basati su cellule, ad es. citotossicità cellulare...
- Allergia, ad es. istamine, uova, latte, mandorle...
- Carenza di crescita, ad es. hGH Attività enzimatica Screening di ormoni e steroidi, ad es. T4, fT3, TSH …
- Screening dell'abuso di droghe, ad es. anfetamine, cocaina, LSD ...
- Screening immunologico malattie infettive, ad es. Clamidia, CMV, epatite, rosolia ... Veterinario, ad es. infezione batterica, fertilità, farmaci, ESB ...
- Alimenti e bevande, ad es. agenti patogeni, tossine ...
- Analisi dell'acqua, ad es. contaminazione batterica, tossine, metalli pesanti ...
- Agricoltura, ad es. endotossine, pesticidi ...
- Ambiente, ad es. prodotti chimici industriali, pesticidi, tensioattivi …
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