Le innovative cellule CALUX® sono state ingegnerizzate con specifici recettori che utilizzano la luciferasi come gene reporter in modo da produrre luce in modo reattivo alla dose quando esposte alle sostanze chimiche.
L'interruttore che accende la luce è specifico per composti o gruppi di composti che hanno la stessa modalità di azione. Ciò fornisce al assay CALUX® una selettività e una rilevanza biologica che non possono essere eguagliate dalle tecniche strumentali.
Il legame dei composti al cosiddetto recettore arilico Ah è seguito dal trasporto del complesso recettore PHAH-Ah nel nucleo della cellula e dal successivo legame a sequenze specifiche nel DNA. Queste specifiche sequenze di DNA sono chiamate elementi reattivi (RE). Il legame del complesso recettore chimico all'IR innesca l'espressione dei geni associati all'ER. L'impatto tossicologico delle sostanze chimiche inizia con il cambiamento osservato nell'espressione genica.
ESEMPI DI SAGGI CALUX®
Diossine
Dal 1 ° luglio 2002, l'Unione europea ha stabilito valori limite massimi per le diossine negli alimenti e nei mangimi. Le diossine sono uno dei composti artificiali più tossici conosciuti e possono essere misurati con DR CALUX®. La tecnologia DR CALUX® viene utilizzata come uno strumento rapido, sensibile ed economico per lo screening di ingredienti di alimenti e mangimi alla ricerca di diossina e composti diossina-simili. Le tecniche strumentali tradizionali come GCMS e HRGCMS possono analizzare solo un campione alla volta, rendendole relativamente lente e costose e non adatte per lo screening rapido di un gran numero di campioni.
Estrogeni
Gli estrogeni come l'estradiolo, un ormone sessuale femminile, hanno un effetto diretto sulla funzione del sistema riproduttivo, del sistema nervoso, del sistema cardiovascolare e del sistema scheletrico. Anche i livelli di zucchero nel sangue, la pelle e altri tessuti e funzioni sono significativamente influenzati dall'estradiolo. Come tutti gli ormoni steroidei, quantità eccessive di estradiolo possono contribuire a una serie di maggiori rischi per la salute. Il livello di estrogeni può essere misurato con ER CALUX®.
MISURA DEI SAGGI CALUX®
La tecnica viene eseguita su piastre a 96 pozzetti, consentendo di analizzare un gran numero di campioni velocemente.
- Dopo la raccolta del campione, viene utilizzato un semplice metodo di estrazione per estrarre il contenuto chimico.
- L'estratto viene purificato e frazionato su richiesta. L'estratto purificato viene quindi sciolto in DMSO. Nel frattempo, le cellule BDS CALUX® vengono coltivate e crescono in piastre da 96 pozzetti in condizioni standardizzate.
- Una volta ottenuto un monostrato confluente, le cellule vengono esposte agli estratti puliti diluiti.
- Dopo la lisi e l'aggiunta di luciferina, l'attività della luciferasi viene quantificata utilizzando un luminometro.
LETTORI PER MICROPLACCI CONSIGLIATI PER GLI ASSAYS CALUX®
Per questa applicazione si consiglia il modello Centro XS LB 963 (Id. Nr. 70325-20) con 2 iniettori automatici di reagenti e pompa di scarico. Sono adatti anche i lettori multimodali Tristar 3 e Tristar 5 con modulo di luminescenza e 2 iniettori.
CALUX® è un marchio registrato di BioDetection Systems B.V.