Passaggio 1: Immobilizzazione
ELISA inizia con una fase di immobilizzazione in cui la piastra ELISA (tipicamente una piastra a 96 o 384 pozzetti) viene trattata con una soluzione di rivestimento di antigene o anticorpo. L'antigene o l'anticorpo viene assorbito dalla superficie del pozzetto della piastra, creando il primo strato. Quindi il buffer di rivestimento viene rimosso, seguito da una serie di lavaggi per rimuovere l'antigene o l'anticorpo non legato.
I lavaggi vengono ripetuti tra ogni passaggio ELISA per rimuovere i materiali slegati. Inoltre, è essenziale rimuovere il liquido in eccesso per evitare la diluizione della soluzione aggiunta nella fase successiva del assay. Forniamo lavatori di micropiastre specializzati per garantire l'uniformità.
Passaggio 2: Saturazione
Nella seconda fase, tutti i siti di legame liberi vengono bloccati utilizzando un buffer contenente proteine non correlate. Questo passaggio è importante per eliminare una potenziale fonte di risultati falsi positivi. La rimozione del buffer bloccante è nuovamente seguita da una serie di fasi di lavaggio.