ELISA Direct

L'ELISA Direct viene in genere utilizzato per analizzare una risposta immunitaria a un antigene, ad es. per la colorazione immunoistochimica di cellule o tessuti. Questo metodo ELISA richiede un antigene rivestito su una piastra multi-pozzetto. Per il rilevamento, viene utilizzato un anticorpo che è stato coniugato direttamente a un enzima. Il flusso di lavoro di questo metodo è relativamente semplice e richiede solo pochi passaggi.

Vantaggi e svantaggi di ELISA Direct

Vantaggi di ELISA Direct

  • Semplice e veloce: è necessario un solo anticorpo e un flusso di lavoro composto da pochi passaggi
  • Meno incline agli errori: numero relativamente ridotto di passaggi di pipettaggio rispetto ad altri metodi ELISA e, a causa del requisito di un singolo anticorpo, nessun rischio di reattività crociata degli anticorpi

Svantaggi di ELISA Direct

  • Sensibilità limitata: nessuna fase di amplificazione del segnale
  • Sviluppo del test che richiede tempo: ogni target del test richiede uno specifico anticorpo primario coniugato, il che rende anche il test relativamente costoso
  • Rischio di reattività anticorpale limitata: l'attaccamento dell'enzima all'anticorpo può limitare la disponibilità spaziale dei siti sull'anticorpo che dovrebbero legarsi all'antigene

ELISA Indirect

ELISA Indirect il metodo ELISA più popolare - utilizza un processo di rilevamento in 2 fasi. In primo luogo, un anticorpo primario senza marcatori si lega specificamente all'antigene. In secondo luogo, un anticorpo secondario coniugato con enzima si lega specificamente all'anticorpo primario. Questo metodo viene generalmente utilizzato per determinare la concentrazione totale di anticorpi nei campioni.

Vantaggi e svantaggi di ELISA Indirect

Vantaggi di ELISA Indirect

  • Flessibilità: l'anticorpo secondario può essere utilizzato purché corrisponda alla specie ospite dell'anticorpo primario e un'ampia varietà di anticorpi secondari marcatori è disponibile in commercio
  • Sensibilità: più di un anticorpo marcato può legare l'anticorpo primario perché ogni anticorpo primario contiene diversi epitopi
  • Immunoreattività massima: nessuna marcatura interferisce con i siti sull'anticorpo primario
  • Economico: sono necessari meno anticorpi marcati

Svantaggi di ELISA Indirect

  • Flusso di lavoro più complesso: è necessaria una fase di incubazione aggiuntiva per l'anticorpo secondario
  • Potenziale di reattività crociata: segnale non specifico dovuto alla reattività crociata con l'anticorpo secondario

ELISA Sandwich

In ELISA Sandwich viene utilizzato un cosiddetto anticorpo di cattura per rivestire i pozzetti che poi lega l'antigene dal campione. Quindi l'antigene viene rilevato in configurazione ELISA diretta o indiretta. Questo metodo viene spesso utilizzato per analizzare campioni complessi.

Vantaggi e svantaggi di ELISA sandwich

Vantaggi del ELISA sandwich

  • Flessibilità e sensibilità: è possibile utilizzare metodi di rilevamento sia diretti che indiretti
  • Elevata specificità: vengono utilizzati due anticorpi per rilevare l'antigene
  • Adatto per campioni complessi: non è richiesta la purificazione dell'antigene prima della misura

Svantaggi di ELISA sandwich

  • Flusso di lavoro complesso: richiede più passaggi di incubazione rispetto ad altri formati ELISA
  • Richiede una maggiore ottimizzazione: deve essere controllata la reattività crociata tra i diversi anticorpi utilizzati

ELISA Competitive

Ciascuno dei suddetti tipi di analisi può essere adattato per ELISA Competitive, noto anche come ELISA di inibizione. Il concetto di base di questo metodo è l'antigene campione che compete con un antigene inibitore, legandosi a una quantità limitata di anticorpo marcato. L'antigene inibitore è pre-rivestito su una micropiastra. Quindi il campione preincubato con l'anticorpo marcato viene aggiunto ai pozzetti. Il segnale rilevato sarà tanto più debole quanto più antigene era nel campione poiché meno anticorpi saranno in grado di legarsi all'antigene nei pozzetti. Questo metodo viene in genere utilizzato per analizzare piccoli antigeni che hanno un singolo epitopo.

Vantaggi e svantaggi di ELISA Competitive

Vantaggi di ELISA Competitive

  • Massima flessibilità: può essere basata sul formato ELISA Direct, Indirect o Sandwich
  • Massima specificità: l'antigene viene catturato e rilevato in modo specifico
  • Molto robusto: riduce al minimo gli effetti della diluizione del campione e degli effetti della matrice del campione

Svantaggi di ELISA Competitive

  • Piuttosto lungo: protocollo molto complesso
  • Si applicano gli svantaggi del formato di rilevamento selezionato