ELISA – Risoluzione dei problemi

Segnale debole o assente

Conservazione del reagente non corretta

Ricontrolla se hai seguito le raccomandazioni del produttore del tuo kit.

Anticorpo conservato a 4 ° C per diverse settimane o sottoposto a ripetuti cicli di congelamento / scongelamento

Utilizzare una nuova aliquota di anticorpo.

Reagenti scaduti

Non utilizzare reagenti che abbiano superato la data di scadenza.

Preparate diluizioni errate

Controlla se i tuoi calcoli sono corretti. Utilizzare una concentrazione maggiore di reagente di rilevamento.

Configurazione errata del assay

Ripetere l’assay e assicurarsi che i reagenti siano stati preparati secondo il protocollo e aggiunti nell'ordine corretto.

Impostazioni errate del lettore di piastre

Assicurati che le impostazioni del tuo lettore di micropiastre riflettano la lunghezza d'onda / i filtri consigliati.

Non è stata utilizzata una quantità sufficiente di anticorpi

Aumenta la concentrazione del tuo anticorpo primario e / o secondario

Pozzetti danneggiati da pipette o aghi di lavaggio.

Fare attenzione durante la dispensanzione e l'aspirazione dentro e fuori dai pozzetti durante il pipettaggio manuale. Se necessario ricalibrare i lavatori automatici per piastre in modo che gli aghi non tocchino il fondo dei pozzetti.

Segnale di fondo alto

Temperatura di incubazione errata

Seguire le raccomandazioni del produttore del kit o ottimizzare la temperatura di incubazione

Tempi di incubazione errati

Segui le raccomandazioni del produttore del kit o ottimizza il tempo di incubazione

Lavaggio insufficiente

Se si pipetta manualmente, capovolgere la piastra sul tessuto assorbente e lasciarla drenare completamente per rimuovere ogni residuo di fluido. Può essere utile anche aumentare il numero di cicli di lavaggio.

Substrato esposto alla luce

Eseguire l'incubazione del substrato al buio

Reazioni non si sono fermate

Assicurati di utilizzare la soluzione di arresto come consigliato nel protocollo per evitare l'eccessivo sviluppo.

Repliche incoerenti

Lavaggio insufficiente

Se si pipetta manualmente, capovolgere la piastra sul tessuto assorbente e lasciarla drenare completamente per rimuovere ogni residuo di fluido. Può essere utile anche aumentare il numero di cicli di lavaggio.

Nessun legame alla piastra dell'anticorpo di cattura

Preparare entrambi i passaggi, rivestimento e blocco, come raccomandato nel protocollo. Assicurati di utilizzare una piastra ELISA.

Sigillatura della piastra errata

Non riutilizzare il sigillante per evitare la contaminazione da pozzetto a pozzetto. Utilizzare un sigillante per piastre durante l'incubazione.