Unités de sensibilité
La plupart des spécifications des lecteurs de microplaques exprimeront leur sensibilité sous la forme d'une quantité de substance, généralement de l'ATP ou de la luciférase pour la luminescence et de la fluorescéine pour la fluorescence. Pour les autres technologies de détection, il peut s'agir de toute autre substance détectée par un kit utilisant cette technologie. Vous utiliserez également des termes tels que Femtomole, Attomole et Zeptomole. Alors, que signifient ces termes?
Comme vous le savez, le nombre d'Avogadro est le nombre de molécules dans une mole de substance. Il a une valeur de 6,022 x 1023. Ainsi, une mole de substance est constituée de 602 250 000 000 000 000 000 000 000 de molécules:
- Une Femtomole est 1 x 10-15 ou un quadrillionième de mole (0,000000000000001). Cela représente environ 602.200.000 molécules (numéro d'Avogadro X (1 x 10-15).
- Un attomole est 1 x 10-18, soit un quintillionième de mole (0,000000000000000001) et représente environ 602 200 molécules.
- Un zéptomole est 1 x 10-21, soit un sextillionième de mole (0,0000000000000000000000001) et représente environ 602 200 molécules.
Comme vous pouvez le voir ci-dessus, cela signifie que nous avons affaire à des nombres extrêmement petits, en particulier au niveau du zeptomole. Alors, comment pouvons-nous utiliser tout cela pour évaluer la performance de chaque instrument? Il y a deux critères clés que nous devons considérer : la limite inférieure de détection (sensibilité) et le coefficient de variation.
- La limite inférieure de détection est la quantité minimale d'échantillon qui génère une réponse de l'instrument au-dessus du bruit blanc et est appelée sensibilité.
- Le coefficient de variation est le pourcentage de variation sur uné série de lectures au fil du temps - cela implique la cohérence des performances de l'instrument.
Le coefficient de variation et la limite inférieure doivent être obtenus en utilisant uniquement des normes connues.
Calcul de la limite inférieure de détection
Chez Berthold, nous n'utilisons uniquement que des normes connues et la formule suivante pour calculer la limite de détection:
| ConcentrationS | concentration du signal de l'étalon* en pg/mL |
| StdevB | écart type des puits remplis de blanc |
| meanS | moyenne des puits avec norme* |
| meanB | moyenne des puits remplis de blanc |
* Tout point standard avec des valeurs moyennes au moins 100 fois supérieures aux valeurs moyennes du blanc.
En raison de la formule ci-dessus, un arrière-plan stable devient vraiment important : nous prenons 3 écarts types de la valeur moyenne du fond, qui est > 99% de la distribution normale. Un instrument sensible fera une distinction claire entre le bruit du blanc et le signal de l'échantillon. Regardez l'exemple ci-dessous pour illustrer les effets d'une variation d'arrière-plan plus élevée:
| Instrument 1 | Instrument 2 | |
|---|---|---|
| meanB | 50 | 15 |
| StdevB | 10 | 15 |
| ConcentrationS (pg/mL) | 100 | 100 |
| Norme de signal | 100,000 | 100,000 |
| Signal/Bruit | 2,000 | 6,667 |
| Limite de détection calculée | 0.030 | 0.045 |
Bien que l'instrument 2 ait un signal de fond plus faible, il est moins sensible en raison de son écart-type de fond plus élevé. Une limite de détection inférieure (sensibilité) peut vous aider à économiser à la fois de l'argent et du temps, lorsqu'il s'agit de capturer des signaux proches de la limite de détection : d'une part, elle vous aide à réduire la consommation de réactifs coûteux ou de cellules précieuses ; d'autre part, vous pouvez réduire considérablement le temps de lecture par échantillon et économiser un temps de fonctionnement global précieux. Par conséquent, la stabilité du détecteur utilisé dans votre instrument est extrêmement importante en matière de sensibilité. Pour cette raison, les tubes photo multiplicateurs (PMT) sont triés sur le volet chez Berthold et testés pour les paramètres suivants à différentes températures afin d'obtenir les meilleurs résultats:
- Faible bruit, fond stable
- Gains d'efficacité bleu/vert/rouge
- Stabilité à long terme
- Efficacité de détection élevée
Seuls les PMT à faible bruit, à fond stable, à haut rendement et avec une stabilité à long terme aux températures de laboratoire habituelles sont utilisés pour nos lecteurs de microplaques. Cela garantit les performances dont vous avez besoin pour une recherche réussie. Cela fait du luminomètre pour microplaques Centro XS LB 963 et du lecteur multimode Tristar 5 les instruments les plus sensibles de leur catégorie.