Avec des quantités d'échantillons limitées, la quantification des protéines est généralement effectuée en mesurant l'absorbance à 280 nm dans un spectrophotomètre à micro-volume, ce qui permet de quantifier la protéine totale avec seulement 1 µL d'échantillon. Afin de calculer la concentration des mélanges de protéines en utilisant l'absorbance à 280 nm, on emploie souvent la relation 1 unité O.D. = 1 mg/mL de protéine. Cependant, pour les protéines purifiées connues, la division de l'absorbance par le coefficient d'absorbance de la protéine donnera de meilleurs résultats.
Même si une majorité de laboratoires biologiques et biochimiques ont utilisé l'une de ces méthodes au moins à un moment donné, la détection et la détermination de certaines concentrations de protéines, si possible, peuvent ne pas être satisfaisantes. Le marquage fluorescent des protéines et la détection ultérieure du marquage par mesure de la fluorescence se sont avérés être la méthode de choix dans de nombreux types d'essais. Dans ce cas, un lecteur de fluorescence en microplaque est généralement l'instrument de choix pour la mesure.
NOTES D'APPLICATION RELATIVES À LA QUANTIFICATION DES PROTÉINES
SingleQuant protein quantification assay with the Colibri Microvolume protein quantification based on Amido Black (SingleQuant Assay) with the Colibri Microvolume Spectrophotometer
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PROTEIN QUANTIFICATION USING THE APOLLO LB 917 ABSORBANCE READER This application note demonstrates the suitability of the Apollo absorbance reader for protein quantification using the Bradford, Lowry and BCA assays.
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