Les cellules CALUX® innovantes ont été conçues de manière à générer une lumière dose-dépendante lorsqu'elles sont exposées aux produits chimiques
L'interrupteur qui allume la lumière est spécifique aux composés ou groupes de composés qui partagent le même mode d'action. Cela confère au test CALUX® spécifique une sélectivité et une pertinence biologique que les techniques instrumentales ne peuvent égaler.
Après s'être lié au récepteur Ah, le complexe récepteur PHAH-Ah est transporté dans le noyau cellulaire puis lié à des séquences spécifiques de l'ADN. Ces séquences d'ADN spécifiques sont appelées éléments réactifs (RE). La liaison du récepteur chimique aux ER déclenche l'expression des gènes associés aux ER. L'impact toxicologique des produits chimiques commence par le changement observé dans l'expression des gènes.
EXEMPLES DE TESTS CALUX
Dioxines
À partir du 1er juillet 2002, l'Union européenne a fixé des valeurs maximales pour les dioxines dans les denrées alimentaires et les aliments pour animaux. Les dioxines sont l'un des composés artificiels les plus toxiques connus et peuvent être mesurés avec le DR CALUX®. La technologie DR CALUX® est utilisée comme un outil rapide, sensible et peu coûteux pour le dépistage des dioxines et des composés similaires dans les ingrédients des denrées alimentaires et des aliments pour animaux. Les techniques instrumentales conventionnelles telles que le GCMS et le HRGCMS ne peuvent analyser qu'un seul échantillon, ce qui les rendent comparativement lentes et coûteuses et ne permettant pas de cribler rapidement un grand nombre d'échantillons.
Oestrogènes
Les œstrogènes comme l'œstradiol, une hormone sexuelle féminine, ont un impact direct sur le fonctionnement du système reproducteur, du système nerveux, du système cardiovasculaire et du système squelettique. La glycémie, la peau et d'autres tissus et fonctions sont également affectés de manière significative par l'oestradiol. Comme toutes les hormones stéroïdiennes, des quantités excessives d'oestradiol peuvent contribuer à accroître un certain nombre de risques pour la santé. Le taux d'œstrogène peut être mesuré par le ER CALUX®.
MESURE DES DOSAGES CALUX
La technique est réalisée sur des plaques de 96 puits, permettant d'analyser un grand nombre d'échantillons simultanément.
1. Après l'échantillonnage, le contenu chimique est extrait à l'aide d'une méthode d'extraction simple.
2. L'extrait est purifié et fractionné sur demande. L'extrait purifié est ensuite dissous dans du DMSO. Pendant ce temps, les cellules CALUX® de BDS sont cultivées et finalement mises en culture dans des plaques de 96 puits dans des conditions standardisées.
3. Une fois qu'une monocouche est confluente, les cellules sont exposées aux extraits purifiés dilués.
4. Après lyse et ajout de luciférine, l'activité de la luciférase est quantifiée à l'aide d'un luminomètre.
LECTEURS DE MICROPLAQUES RECOMMANDÉS POUR LES TESTS CALUX®.
Le modèle Centro XS (70325-20) avec 2 injecteurs automatiques de réactifs et une pompe à déchets est recommandé pour cette application. Les lecteurs multimodes Tristar 3 et Tristar 5 avec module de luminescence et 2 injecteurs sont également adaptés.
CALUX® est une marque déposée de BioDetection Systems B.V.