PRINCIPE DE L'AlphaScreen®
AlphaScreen® est basé sur des billes de donneur et d'accepteur enrobées d'hydrogel qui fournissent des groupes fonctionnels pour la conjugaison avec des biomolécules. Les perles se rapprochent lorsque les biomolécules interagissent par liaison moléculaire, par exemple anticorps-antigène ou ligand récepteur. L'excitation au laser à 680 nm d'un photosensibilisateur présent sur la bille du donneur entraîne la production d'oxygène singulet. L'oxygène singulet migre pour réagir avec la chimioluminescence sur la bille d'accepteur. La chimioluminescence active alors les fluorophores qui émettent de la lumière à 520 - 620 nm. Cette cascade de réactions entraîne une énorme amplification du signal. La courte durée de vie de l'oxygène singulet en solution aqueuse (~4 μs) permet une diffusion sur une distance allant jusqu'à ~200 nm. Cela signifie que si les perles du donneur et de l'accepteur ne sont pas à proximité immédiate, aucun signal n'est généré.
APPLICATIONS AlphaScreen®
AlphaScreen® est une méthode homogène qui est bien adaptée à la miniaturisation et à l'utilisation dans le criblage de futurs médicaments. Elle s'est révélée être une méthode fiable et sensible dans de nombreux tests de détection, notamment
- Les messagers secondaires du GPCR tels que l'AMP cyclique ou l'IP3.
- Tests enzymatiques (kinases, hélicases, protéases, phosphatases, ...)
- immunoessai
AlphaScreen® Phosphotyrosine Assay with the Mithras² Validation of the Mithras² LB 943 Multimode Microplate Reader with the AlphaScreen® Phosphotyrosine (P-TYR-100) assay
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LECTEUR DE MICROPLAQUES ADAPTÉ À L'AlphaScreen®
Un laser émettant à 680 nm comme source d'excitation est nécessaire, et une luminescence très sensible utilisant des filtres est recommandée pour les mesures AlphaScreen®. Tous les lecteurs de microplaques ci-dessous sont adaptés à l'AlphaScreen®.
AlphaScreen® est une marque déposée de PerkinElmer.