RÉCEPTEURS COUPLÉS AUX PROTÉINES G (GPCR)
Il existe différentes familles de récepteurs cellulaires, la plus grande étant la famille des récepteurs couplés aux protéines G (GPCR). Les GPCR sont impliqués dans de nombreuses fonctions cellulaires et maladies, comme le cancer ou les troubles neurologiques. La transduction du signal par un GPCR commence par une protéine G inactive couplée au récepteur. Une fois que le GPCR reconnaît un ligand, la conformation du récepteur change pour activer les protéines G, les amenant à se dissocier de l'autre récepteur et à s'associer aux protéines effectrices. L'interaction des protéines G avec le récepteur ou avec des protéines effectrices peut être surveillée à l'aide de BRET. Un test commercial qui améliore la sensibilité et la fiabilité du BRET est le NanoBRET™.
Les GPCR activent 2 voies principales de transduction du signal : la voie de l'AMPc et la voie du phosphatidylinositol. Un outil précieux pour l’étude de chaque voie est la quantification des substances produites par la voie. Les tests HTRF® sont disponibles pour la quantification de l'AMPc, le deuxième messager de la voie de l'AMPc, et de l'inositol monophosphate, un métabolite stable de l'inositol triphosphate produit par la voie du phosphatidylinositol. Le Lecteur Multimode Tristar 5 est compatible avec tous les kits HTRF®.
TESTS DU GÈNE RAPPORTEUR
Une réponse cellulaire importante est la régulation de l’expression des gènes, mais l’expression de nombreux gènes est difficile à mesurer car ils n’ont pas d’effet visible pouvant être quantifié. L’utilisation de gènes rapporteurs constitue un excellent outil pour étudier la régulation de l’expression des gènes. Le système Dual-Luciferase Reporter® (DLR™) est un système de gènes rapporteurs très populaire qui peut être mesuré de manière optimale dans n’importe lequel de nos lecteurs de microplaques.
ACTIVITÉ DES PROTÉINES KINASES
Comme mentionné ci-dessus, d’autres réponses cellulaires importantes sont la régulation des interactions protéine-protéine et de l’activité enzymatique. Les deux peuvent être régulés par la phosphorylation des protéines, réalisée par des protéines kinases. L'activité des protéines kinases peut être surveillée en mesurant la concentration d'ADP dans une solution contenant une protéine kinase d'intérêt. Le test Transcreener® ADP2 FI offre un moyen très pratique, rapide et fiable de quantifier l’ADP. Le Tristar 5 est un lecteur certifié pour la mesure des tests Transcreener® FI.
Dual-Luciferase Reporter™, DLR® et NanoBRET™ sont des marques déposées de Promega Corporation.
HTRF® est une marque déposée de Cisbio Bioassays.
Transcreener® est une marque déposée de Bellbrook Labs.