Instruments pour l'étude des interactions protéine-protéine

Les lecteurs de microplaques sont un large groupe d'instruments qui comprennent à la fois des lecteurs à technologie unique et des lecteurs multimodes. Le principal avantage des lecteurs de microplaques, par rapport aux autres instruments disponibles pour la mesure des techniques d'IPP, est qu'ils peuvent mesurer de nombreux échantillons dans un temps relativement court : tous les lecteurs peuvent mesurer des microplaques de 96 puits, et certains peuvent également mesurer des microplaques de 384 puits et de 1536 puits. De plus, ils ont une excellente sensibilité pour les mesures de fluorescence et de luminescence grâce à l'adoption de tubes photomultiplicateurs qui peuvent détecter même les plus petites quantités de photons. Toutefois, par rapport aux instruments d'imagerie tels que les microscopes confocaux et les systèmes d'imagerie in vivo, les lecteurs de microplaques ne fournissent pratiquement aucune information spatiale qui permettrait de localiser l'interaction.

Le FRET et la complémentation en fluorescence bimoléculaire (BiFC) peuvent être mesurés à l'aide de n'importe quel lecteur de microplaques à fluorescence équipé de filtres appropriés. Toutefois, comme la possibiité de gamme spectrale des paires FRET est très large, il est conseillé de tester tout fluorophore émettant à des longueurs d'onde supérieures à 600 nm par rapport à la gamme spectrale de l'instrument, car dans certains lecteurs, une extension de la gamme spectrale à 850 ou 900 nm est facultative. Comme dans le cas du BRET, les performances du FRET lors de l'utilisation de filtres sont généralement meilleures que celles des monochromateurs.

Bien qu'il soit courant pour les lecteurs de microplaques modernes de pouvoir mesurer le TR-FRET, il s'agit parfois d'une caractéristique optionnelle qui peut manquer dans les instruments bas de gamme ou plus anciens. Cependant, le terme TR-FRET n'est guère utilisé dans les spécifications : il faut plutôt rechercher la TRF (Time-Resolved Fluorescence). En fait, du point de vue de l'instrument, une mesure TR-FRET n'est qu'une combinaison de deux mesures TRF - une pour le donneur et une pour l'accepteur. Les mesures TR-FRET sont également plus performantes lorsqu'elles sont effectuées avec des filtres plutôt qu'avec des monochromateurs, et il faut encore démontrer que la gamme spectrale de l'instrument permet de mesurer tous les fluorophores concernés, puisque la mesure à 665 nm est courante dans certains tests TR-FRET.