ELISA - conseils d'optimisation

Généralement, l'optimisation des composants du test ELISA (anticorps, tampons, échantillons) est réalisée en testant différentes solutions afin d'identifier la concentration de travail idéale pour chaque composant. Pour l'anticorps de capture, on prépare des dilutions dans le tampon de revêtement allant de 5 à 15 µg/ml pour les anticorps non purifiés et de 1 à 12 µg/ml pour les anticorps purifiés par affinité. Les anticorps purifiés par affinité sont recommandés pour obtenir un rapport signal/bruit optimal. L'échantillon doit être ajouté à une concentration élevée et à une concentration faible, reflétant la gamme de travail prévue. Pour l'anticorps de détection, une dilution similaire peut être effectuée dans un diluant standard, allant de 1 à 10 µg/ml pour les anticorps non purifiés et de 0,5 à 5 µg/ml pour les anticorps purifiés par affinité.

Il existe un large éventail de tampons bloquants commerciaux, dont certains contiennent de la BSA. Les fabricants de ces tampons fournissent généralement des protocoles d'optimisation complets. Si le tampon bloquant n'est pas pré-formulé, essayez différentes concentrations de la protéine, comme la BSA.

Certains types d'échantillons peuvent provoquer des effets de matrice, par exemple le sérum ou le plasma. Ces effets peuvent être réduits en diluant l'échantillon. Les diluants standard doivent refléter la matrice de l'échantillon aussi fidèlement que possible et la linéarité des dilutions doit être vérifiée pour assurer une bonne dynamique.