La técnica tiene un límite de detección de 1 pg de ATP, que es equivalente a aproximadamente 1000 células bacterianas.
En comparación con otros métodos, el uso de la detección de ATP bioluminiscente para el monitoreo de la higiene ofrece:
- Velocidad (minutos, mucho más rápido que la siembra y el recuento de colonias)
- Comodidad
- Medición de la higiene total
PRINCIPIO DE LA MEDICIÓN DE ATP PARA EL MONITOREO DE LA HIGIENE
Para las pruebas de higiene, se determina el contenido total de ATP de la muestra. Esto incluirá ATP eucariota y microbiano. Se debe tener precaución para evitar la contaminación de la muestra o el material, ya que el ATP se encuentra en muchas superficies.
Un hisopo libre de ATP se proporciona prehumedecido o es humedecido por el usuario con un tampón libre de ATP, agua o extractante. El uso de extractante puede ayudar en el muestreo, ya que es eficaz para liberar el ATP de la superficie. Usando luminómetros portátiles, la prueba del hisopo generalmente se realiza de inmediato. Sin embargo, con algunos productos los hisopos son estables durante un número de horas permitiendo al usuario volver al instrumento en una "estación de trabajo" si se prefiere.
Para determinar el nivel de ATP microbiano, se utiliza la extracción selectiva. En primer lugar, se extrae ATP no microbiano con un detergente no iónico (Triton X-100) y después se destruye tratando con un alto nivel de ATPasa durante 5 minutos. Posteriormente, el ATP microbiano se extrae usando ácido tricloroacético (5%), un disolvente orgánico (etanol, acetona o cloroformo) o detergentes catiónicos, lo que requerirá una dilución posterior para evitar la inhibición de la luciferasa. En la última etapa, se añaden luciferasa y luciferina y se mide la luminiscencia usando un luminómetro. Se requiere un tiempo cuidadoso de mezcla y lectura para permitir la inhibición de la luciferasa (Simpson y Hammond, 1991). Dado que el nivel de ATP en las células eucariotas es tres órdenes de magnitud mayor que en las células bacterianas, a veces es difícil cuantificar por separado el ATP eucariota y microbiano con precisión.
Muchos fabricantes ofrecen todos los reactivos y materiales necesarios como kits listos para usar, lo que hace que el protocolo sea más fácil y rápido.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Generalmente, las superficies limpias muestran bajos niveles de ATP total. Por lo tanto, la salida de luz mayor de 2 a 3 veces el fondo de la superficie limpia indica que el área probada está contaminada con material biológico. Sin embargo, el método es muy sensible y en la práctica se puede aceptar un umbral de 10 veces el fondo. Independientemente del producto que se utilice, es necesario realizar un trabajo preliminar para establecer los límites de aprobación/reprobación relevantes para la prueba. Esto se hace generalmente mediante la recopilación de datos de referencia de acuerdo con los procedimientos de limpieza normales. El nivel establecido dependerá del tipo y condición de la superficie y del método de limpieza utilizado.
INSTRUMENTOS RECOMENDADOS PARA EL MONITOREO DE LA HIGIENE
Los luminómetros portátiles suelen ser el instrumento de elección para el monitoreo de la higiene, ya que la medición se realiza con frecuencia en el sitio. Los luminómetros de mano baratos basados en fotodiodos son a veces suficientes para el análisis cualitativo (contaminado/no contaminado). Sin embargo, los instrumentos basados en PMT como el Junior LB 9509 ofrecen una mayor sensibilidad y rango dinámico y son la mejor opción para mediciones cuantitativas.