Las RLU son las unidades utilizadas para la mayoría de las mediciones de luminiscencia. Las RLU no tienen ningún significado físico y a menudo no son comparables entre diferentes instrumentos. Esto se debe a la forma en que se mide la luz en un luminómetro: brevemente, los luminómetros usan un tubo fotomultiplicador (PMT); los fotones que golpean un fotocátodo en la ventana de entrada de un PMT producen electrones, que luego se aceleran por un campo de alto voltaje y se multiplican en número dentro de una cadena de dinodos por el proceso de emisión secundaria, y finalmente alcanzan el ánodo conectado a un circuito de procesamiento de salida. Luego, esto se traduce en una señal de salida, que puede ser un pulso (si el PMT funciona en modo de conteo de fotones) o una corriente analógica si el PMT funciona en modo analógico (también conocido como modo de corriente).
La salida se ve afectada por el modo del PMT, el voltaje aplicado, la eficiencia del PMT y otros parámetros, que hacen que sea realmente difícil relacionar la salida con cualquier magnitud física dependiendo de la cantidad de luz emitida por la muestra. Como consecuencia, algunos instrumentos pueden dar valores entre 0 y 10 millones, otros entre 0,0001 y 100, otros algo completamente diferente. Por lo tanto, las unidades de luz se mantienen en relación con otras mediciones tomadas en el mismo instrumento.
Si bien el uso de unidades relativas puede ser un problema en algunas disciplinas, es perfectamente adecuada para la mayoría de las aplicaciones de ciencias de la vida, ya que en su mayoría están relacionadas con un control y tratan todos los resultados en relación con el valor de ese control (por ejemplo, los valores en la condición B pueden ser 50% del valor de control, mientras que los valores en la condición C son 12 veces más altos que los del control).
Es posible medir una muestra de una intensidad conocida en dos instrumentos diferentes y usar el valor como referencia para comparar mediciones en ambos instrumentos. Esto es fácil y bastante confiable si los instrumentos son similares (por ejemplo, el mismo fabricante y el mismo tipo de PMT), pero se debe tener cuidado al comparar instrumentos que son muy diferentes (por ejemplo, con PMT que funciona en diferentes modos, con diferentes rangos dinámicos, etc.). No se recomienda usar muestras biológicas o químicas como referencia, ya que hay un grado importante de variabilidad, y a veces no es posible obtener la misma medición de la misma muestra (por ejemplo, en las reacciones "flash" la muestra podría medirse solo una vez, y en las reacciones "glow" podría haber una disminución notable en la luminiscencia entre la primera y la segunda medición).
En su lugar, se recomiendan fuentes de luz electrónicas (por ejemplo, LED) que se calibren periódicamente. Ejemplos de tales fuentes son nuestras placas de ensayo de luminiscencia y tubos de ensayo de luminiscencia, que se usan a menudo para verificar el rendimiento de luminómetros de microplacas y luminómetros de tubos, respectivamente.
Nuestros luminómetros de tubo y lectores de microplacas proporcionan valores de RLU que son muy similares y comparables entre sí. Utilizamos PMT que funcionan en modo de conteo de fotones e implementamos un factor RLU interno para calibrar nuestros instrumentos a fuentes de luz estables de intensidad conocida.
¿RLU O RLU/S?
Muchos instrumentos expresan los valores medidos como RLU, mientras que otros tienen en cuenta el tiempo de medición y usan RLU/s en su lugar. En Berthold Technologies utilizamos RLU/s por defecto, ya que esto hace que los valores sean comparables independientemente del tiempo de medición. Además, es realmente fácil convertir RLU/s a RLU: simplemente multiplique por el tiempo de medición.