PRINCIPIO DE LOS INMUNOENSAYOS
El principio básico de estos ensayos es la especificidad de la reacción anticuerpo-antígeno. Existen varios formatos diferentes de inmunoensayos (véase a continuación en "Tipos de inmunoensayos") pero todos ellos implican un anticuerpo específico que se une a su antígeno y un marcador que se usa para detectar el complejo antígeno-anticuerpo.
El marcador se puede unir al anticuerpo primario que se une al antígeno, a un anticuerpo secundario que se une al anticuerpo primario, o a una porción de antígeno que se añade a la muestra y compite con el antígeno que se va a medir. Para separar la fracción unida de la fracción libre, se necesita al menos una etapa de lavado. En realidad, como los inmunoensayos normalmente implican múltiples etapas de lavado, dispensación e incubación, a menudo se usan estaciones de trabajo para automatizar el proceso.
TIPOS DE INMUNOENSAYOS
Inmunoensayos por señal
Una forma útil de clasificar los inmunoensayos es por el tipo de señal que se mide, ya que esto tiene un impacto en su sensibilidad y en la instrumentación necesaria para medirlos. Los tipos más comunes de inmunoensayos son:
- ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas) si la señal es proporcionada por una enzima que produce un sustrato coloreado que se mide usando absorbancia. Usualmente se miden usando un lector de ELISA o en una estación de trabajo de ELISA que automatiza el ensayo completo. Son el tipo más común de inmunoensayo, pero el ELISA tiene una sensibilidad limitada, que puede mejorarse usando métodos de detección más sensibles.
- FIA (inmunoensayo fluorescente) si la señal es proporcionada por moléculas fluorescentes (por ejemplo, FITC); en este caso, la medición se realiza utilizando un fluorómetro de microplacas.
- CLIA (Inmunoensayo quimioluminiscente) si la señal es proporcionada por una enzima que cataliza una reacción que produce luz. Se miden usando un luminómetro de microplacas. La luminiscencia es uno de los métodos de detección que proporciona mayor sensibilidad.
- RIA (ensayo radioinmunológico) si la señal es proporcionada por la radiación proveniente de un radioisótopo, como 125I. Como a menudo son isótopos emisores gamma, generalmente se miden utilizando un contador gamma. La radiación es otro de los métodos de detección que proporciona la mayor sensibilidad.
- Las tecnologías de detección más modernas también se han aplicado a inmunoensayos, como la tecnología TRF y Alpha.
Inmunoensayos por formato
Existen varios formatos de inmunoensayo diferentes, dependiendo de qué complejos antígeno-anticuerpo se forman y dónde está la señal a cuantificar. Como la terminología proviene del inmunoensayo más habitual, ELISA, a menudo se les llama por el nombre de los respectivos formatos ELISA:
- Inmunoensayo directo: el anticuerpo marcado se une directamente al antígeno de interés.
- Inmunoensayo indirecto: el anticuerpo marcado se une al anticuerpo de interés, que se une a un antígeno inmovilizado.
- Inmunoensayo tipo sándwich: el antígeno de interés se captura entre un anticuerpo inmovilizado y el anticuerpo marcado.
- Inmunoensayo competitivo: el antígeno de muestra compite con un antígeno inhibidor, uniéndose a una cantidad limitada de anticuerpo marcado.
Puede encontrar más información sobre los formatos de inmunoensayo en nuestra página Formatos ELISA.
Applications of immunoassays
Los inmunoensayos se utilizan ampliamente en la investigación, el descubrimiento de fármacos y el diagnóstico para la detección altamente específica y rentable de analitos, que incluyen, entre otros:
- Marcadores tumorales, por ejemplo, AFP, CEA, hCG, PSA…
- Marcadores cardíacos, por ejemplo, CK-MB, PCR, digoxina, mioglobina…
- Ensayos basados en células, por ejemplo, citotoxicidad celular...
- Alergia, por ejemplo, histaminas, huevo, leche, almendos…
- Deficiencia de crecimiento, por ejemplo, hGH
- Actividad enzimática
- Detección de hormonas y esteroides, por ejemplo, T4, fT3, TSH…
- Detección del abuso de drogas, por ejemplo, anfetaminas, cocaína, LSD…
- Detección inmunológica
- Enfermedades infecciosas, por ejemplo, clamidia, CMV, hepatitis, rubéola…
- Veterinaria, por ejemplo, infección bacteriana, fertilidad, medicamentos, BSE…
- Alimentos y bebidas, por ejemplo, patógenos, toxinas…
- Análisis de agua, por ejemplo, contaminación bacteriana, toxinas, metales pesados…
- Agricultura, por ejemplo, endotoxinas, pesticidas…
- Medio ambiente, por ejemplo, productos químicos industriales, pesticidas, tensioactivos…
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