Las innovadoras células CALUX® han sido modificadas para que produzcan luz de una manera proporcional a la dosis cuando se exponen a ciertos productos químicos.


El interruptor que enciende la luz es específico para compuestos o grupos de compuestos que tienen el mismo modo de acción. Esto proporciona al ensayo CALUX® específico una selectividad y relevancia biológica que no se pueden igualar mediante técnicas instrumentales.

Los compuestos que se unen al denominado receptor Ah son seguidos por el transporte del complejo receptor PHAH-Ah al núcleo de la célula y la posterior unión a secuencias específicas en el ADN. Estas secuencias de ADN específicas se denominan elementos de respuesta (RE). La unión del complejo químico-receptor al RE desencadena la expresión de genes asociados al RE. El impacto toxicológico de los productos químicos comienza con el cambio observado en la expresión génica.

EJEMPLOS DE ENSAYOS CALUX®

Dioxinas

A partir del 1 de julio de 2002, la Unión Europea fijó valores límite máximos para dioxinas en alimentos y piensos. Las dioxinas son uno de los compuestos artificiales más tóxicos conocidos y se pueden medir con el DR CALUX®. La tecnología DR CALUX® se está utilizando como una herramienta rápida, sensible y rentable para cribar ingredientes de alimentos y piensos en busca de dioxinas y compuestos similares a las dioxinas. Las técnicas instrumentales tradicionales como GC-MS y HRGC-MS solo pueden analizar una muestra a la vez, lo que las hace comparativamente lentas y costosas y no son adecuadas para examinar grandes cantidades de muestras rápidamente.

 

Estrógenos

Los estrógenos como el estradiol, una hormona sexual femenina, tienen un efecto directo sobre la función del sistema reproductivo, el sistema nervioso, el sistema cardiovascular y el sistema esquelético. Los niveles de azúcar en la sangre, la piel y otros tejidos y funciones también están significativamente influenciados por el estradiol. Al igual que todas las hormonas esteroides, cantidades excesivas de estradiol pueden contribuir a una serie de mayores riesgos para la salud. El nivel de estrógeno se puede medir mediante el ER CALUX®.

MEDICIÓN DE LOS ENSAYOS CALUX®

La técnica se realiza en placas de 96 pocillos, lo que permite analizar un gran número de muestras simultáneamente.

  1. Después de la recolección de la muestra, se utiliza un método simple para extraer el contenido químico.
  2. El extracto se purifica y se fracciona a petición. El extracto purificado se disuelve entonces en DMSO. Mientras tanto, las células CALUX® de BDS se cultivan y finalmente se cultivan en placas de 96 pocillos en condiciones estandarizadas.
  3. Una vez se obtiene una monocapa confluente, las células se exponen a los extractos limpios diluidos.
  4. Después de la lisis y la adición de luciferina, se cuantifica la actividad de luciferasa usando un luminómetro.

LECTORES DE MICROPLACAS RECOMENDADOS PARA ENSAYOS CALUX®

Para esta aplicación se recomienda el modelo Centro XS (70325-20) con 2 inyectores automáticos de reactivos y bomba de residuos. También son adecuados los lectores multimodo Tristar 3 y Tristar 5 con módulo de luminiscencia y 2 inyectores.

CALUX® es una marca registrada de BioDetection Systems B.V.