PRINCIPIO de ALPHASCREEN®
AlphaScreen® se basa en microesferas donantes y aceptoras recubiertas de hidrogel que proporcionan grupos funcionales para su conjugación con biomoléculas. Las microsesferas se encuentran en estrecha proximidad cuando las biomoléculas interactúan por unión molecular, por ejemplo anticuerpo-antígeno o receptor-ligando. La excitación con láser a 680 nm de un fotosensibilizador presente en la microesfera donante da como resultado la producción de oxígeno singlete. El oxígeno singlete migra para reaccionar con grupos quimioluminiscentes de la microesfera aceptora. Estos activan entonces fluoróforos que emiten luz a 520-620 nm. Esta cascada de reacción da como resultado una amplificación enorme de la señal. La corta vida útil del oxígeno singlete en solución acuosa (~4 μs) permite la difusión a una distancia de hasta ~200 nm. Esto significa que, si las microesferas donadoras y aceptoras no están en estrecha proximidad, no se produce ninguna señal.
APLICACIONES de ALPHASCREEN®
AlphaScreen® es un método homogéneo que es muy adecuado para la miniaturización y el uso en el cribado de descubrimiento de fármacos. Se ha demostrado que es un método confiable y sensible en muchos ensayos de detección, incluyendo:
- Mensajeros secundarios de GPCR como AMP cíclico o IP3.
- Ensayos enzimáticos (quinasas, helicasas, proteasas, fosfatasas...)
- Inmunoensayos
AlphaScreen® Phosphotyrosine Assay with the Mithras² Validation of the Mithras² LB 943 Multimode Microplate Reader with the AlphaScreen® Phosphotyrosine (P-TYR-100) assay
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LECTORES DE MICROPLACAS ADECUADOS PARA ALPHASCREEN®
Para las mediciones de AlphaScreen® se requiere un láser que emita a 680 nm como fuente de excitación, y se recomienda una luminiscencia de alta sensibilidad utilizando filtros. Los lectores de microplacas listados a continuación son adecuados para AlphaScreen®.
AlphaScreen® es una marca registrada de PerkinElmer.