Der Begriff der zeitlich gelösten Fluoreszenz (TRF) kann mit zwei verschiedenen Bedeutungen verwendet werden:

  • Die Messung der Fluoreszenz einer Probe als Funktion der Zeit nach der Anregung durch einen Lichtimpuls. Zur Differenzierung wird dieses Verfahren oft als Fluoreszenz-Lebensdauermessung bezeichnet..
  • Verwendung von Fluorophoren mit einer ausgeprägten Fluoreszenzlebensdauer zur Vermeidung von Interferenzen durch Moleküle mit einer sehr unterschiedlichen Fluoreszenzlebensdauer oder durch andere Faktoren (vor allem Anregungslicht).

Bei der Diskussion zum Thema Mikroplatten-Reader, bezieht sich die TRF in der Regel auf die zweite Bedeutung.

 

     

    Die Fluorophore der Wahl sind in der Regel Chelate von Lanthaniden (am häufigsten Europium, Terbium und Samarium), aufgrund der folgenden Eigenschaften:

    • Ihre Fluoreszenzlebensdauer liegt im Bereich von Mikrosekunden (μs), während bei den meisten Fluorophoren die Lebensdauer ihrer Fluoreszenz im Bereich von Nanosekunden (ns) liegt. Dies ermöglicht die Messung, nachdem sowohl das Licht der Anregung als auch die Fluoreszenz eines beliebigen anderen Fluorophors in der Probe vollständig abgeklungen sind, was den Hintergrund stark reduziert und somit das Signal-Rausch-Verhältnis erhöht.
    • Der große Unterschied zwischen ihren Anregungs- und Emissionswellenlängen (Stokes' Shift) und den engen Emissionspeaks trägt dazu bei, den Signal-Rausch-Abstand weiter zu erhöhen.

    Anwendungen der zeitaufgelösten Fluoreszenz

    Das große Signal-Rausch-Verhältnis von Verfahren auf TRF-Basis bietet eine sehr hohe Empfindlichkeit. Infolgedessen wurden viele Assays mit den zeitaufgelösten Fluoreszenzeigenschaften von Lanthanidchelaten entwickelt. Der beliebteste Assaytyp mit TRF sind TR-FRET Assays. Die ausgeprägte Fluoreszenzlebensdauer und die spektralen Eigenschaften der verschiedenen Lanthanidchelate ermöglichen die Entwicklung von Multiplex-Assays.

     

    Transcreener® GDP TR-FRET Red Assay with Mithras² Validation of the Mithras² Multimode Microplate Reader with the Transcreener® GDP TR-FRET Red assay

    PDF | 990.0 KB

    Transcreener® GDP TR-FRET Red Assay with TriStar² S Validation of the TriStar² S Multimode Microplate Reader with the Transcreener® GDP TR-FRET Red assay

    PDF | 934.0 KB

    cAMP/IP-One HTplex HTRF® assay with Mithras cAMP/IP-One HTplex cell-based experiment performed on Mithras LB 940 Multimode Microplate Reader using HTRF® technology

    PDF | 686.6 KB

    Für TRF geeignete Mikroplatten-Reader

    Ein Mikroplatten-Reader, der in der Lage ist, Fluoreszenz mit hoher Empfindlichkeit unter Verwendung von Filtern zu messen und mit einer Blitzlampe ausgestattet ist, ist die beste Wahl für TRF (es kann auch ein Monochromator-basiertes Instrument verwendet werden, aber mit geringerer Leistung). Für einige Anwendungen kann ein Detektor mit erweitertem Spektralbereich (über 650 nm) erforderlich sein. Alle untenstehenden Mikroplatten-Reader werden für die TRF empfohlen.