Das Prinzip von HTRF®
HTRF® basiert auf Time-Resolved Fluorescence (TRF) und Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET).
Bei HTRF® wird das Lanthanid-Chelat als Donor verwendet und ist entweder Europium-Kryptat (Eu3+-Kryptat) oder Lumi4™-Tb (Tb2+-Kryptat), und der Akzeptor ist entweder XL665, ein modifiziertes Allophycocyanin, oder d2, ein Akzeptor der zweiten Generation. Darüber hinaus implementiert HTRF® eine ratiometrische Messung, die sowohl die Emissionswellenlänge des Donors als auch des Akzeptors verwendet, um die Well-to-well-Variabilität und die Signalquenchung von Assay-Komponenten und -Medien zu korrigieren, die in anderen TR-FRET-Assays nicht vorhanden ist.
HTRF® Anwendungen
HTRF® wird zur Messung molekularer Wechselwirkungen in vielen Forschungsbereichen eingesetzt, darunter:
- Protein-Protein-Interaktionen
- GPCRs
- Biomarker
- Phosphoproteine
- Kinasen
- Cytokine
- Epigenetik
Application Notes zum Thema HTRF®
cAMP/IP-One HTplex HTRF® assay with Mithras cAMP/IP-One HTplex cell-based experiment performed on Mithras LB 940 Multimode Microplate Reader using HTRF® technology
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Für HTRF® empfohlene Mikroplatten-Reader
Es wird ein Mikroplatten-Reader mit folgenden Eigenschaften empfohlen:
- Fluoreszenzmessung mit Filtern
- Blitzlampe als Lichtquelle
- Detektor mit erweitertem Spektralbereich (über 650 nm)
Alle untenstehenden Mikroplatten-Reader sind für HTRF® geeignet.
HTRF® ist eine eingetragene Marke von Cisbio Bioassays.