G-PROTEIN-GEKOPPELTE REZEPTOREN (GPCR)
Es gibt verschiedene Familien von Zellrezeptoren, und die größte davon ist die Familie der G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCR). GPCRs sind an vielen Zellfunktionen und Krankheiten wie Krebs oder neurologischen Störungen beteiligt. Die Signaltransduktion durch einen GPCR beginnt mit einem inaktiven G-Protein, das an den Rezeptor gekoppelt ist. Sobald der GPCR einen Liganden erkennt, ändert sich die Konformation des Rezeptors, um die G-Proteine zu aktivieren, so dass sie sich vom anderen Rezeptor lösen und sich mit Effektorproteinen verbinden. Die Interaktion von G-Proteinen mit dem Rezeptor oder mit Effektorproteinen kann mit BRET überwacht werden. Ein kommerzieller Assay, der die Empfindlichkeit und Zuverlässigkeit von BRET verbessert, ist NanoBRET™. Wenn Sie mehr über die Verwendung dieses PPI-Analysetools in einem Mikroplatten-Lesegerät erfahren möchten, laden Sie unsere Application Note herunter:
GPCRs aktivieren zwei wichtige Signaltransduktionswege: den cAMP-Weg und den Phosphatidylinositol-Weg. Ein wertvolles Instrument für die Untersuchung jedes Signalwegs ist die Quantifizierung der von diesem Weg produzierten Substanzen. HTRF®-Assays sind für die Quantifizierung von cAMP, dem zweiten Botenstoff des cAMP-Stoffwechselwegs, und von Inositolmonophosphat, einem stabilen Metaboliten von Inositoltriphosphat, das durch den Phosphatidylinositol-Stoffwechselweg produziert wird, erhältlich. Der Tristar 5 Multimode Reader ist mit allen HTRF®-Kits kompatibel.
Reportergen-Assays
Eine wichtige zelluläre Reaktion ist die Regulierung der Genexpression, aber die Expression vieler Gene ist schwer zu messen, da sie keine sichtbare Wirkung haben, die quantifiziert werden kann. Ein hervorragendes Instrument zur Untersuchung der Regulierung der Genexpression ist die Verwendung von Reportergenen. Das Dual-Luciferase Reporter® System (DLR™) ist ein sehr beliebtes Reportergensystem, das in jedem unserer Mikroplatten-Reader optimal gemessen werden kann.
PROTEINKINASE-AKTIVITÄT
Wie oben erwähnt, sind weitere wichtige zelluläre Reaktionen die Regulierung von Protein-Protein-Interaktionen und der enzymatischen Aktivität. Beides kann durch Phosphorylierung von Proteinen reguliert werden, die durch Proteinkinasen durchgeführt wird. Die Aktivität von Proteinkinasen kann durch Messung der ADP-Konzentration in einer Lösung überwacht werden, die eine Proteinkinase von Interesse enthält. Der Transscreener® ADP2 FI-Assay bietet eine sehr praktische, schnelle und zuverlässige Möglichkeit zur Quantifizierung von ADP. Der Tristar 5 ist ein zertifiziertes Lesegerät für die Messung von Transcreener® FI-Assays.
Dual-Luciferase Reporter™, DLR® und NanoBRET™ sind Marken der Promega Corporation.
HTRF® ist eine eingetragene Marke von Cisbio Bioassays.
Transscreener® ist eine eingetragene Marke von Bellbrook Labs.